这哈尔滨医科大学发的10.7分文章，他做的是巨噬细胞铁死亡，逻辑还挺严谨的......

那天在PubMed上冲浪的时候，突然找到了这么一篇巨噬细胞死亡的文章。这篇文章是哈尔滨医科大学发表在10.7分的Redox Biol上的，他们做了药物在动脉粥样硬化中对巨噬细胞铁死亡的抑制（铁死亡的抑制，也就是对于铁死亡的调控，其实看到标题中的NRF2和KEAP1，就应该知道大概是怎么回事了，可以去翻翻《信号通路是什么鬼？》系列里的铁死亡调控那几章，复习下）：

AS（动脉粥样硬化）病程晚期，会观察到斑块中大量巨噬细胞死亡，这时的巨噬细胞的死亡会导致炎症反应的增强。他们使用MCL（木香内酯）来进行了抗炎症的治疗，并分析MCL对于AS的作用。首先他们做了APOE缺失的小鼠AS模型，然后对模型施用MCL。结果发现，MCL给药，减弱了AS模型小鼠的病情进展：

由于巨噬细胞的铁死亡在AS病程进展中的重要作用，于是他们想看看MCL是否会影响巨噬细胞的铁死亡。他们分析了MCL给药后，GPX4和xCT的表达情况（xCT其实就是SLC7A11，他和GPX4都是抑制铁死亡的关键分子，不清楚的话，可以看看《信号通路是什么鬼？》系列里铁死亡的那几章），结果发现在高热量饮食诱导后，MCL可以促进小鼠总动脉中的GPX4和xCT表达。MCL也能降低主动脉中的脂质氧化，这也是抑制铁死亡发生的标志：

接着他们对体外培养的巨噬细胞用ox-LDL（氧化修饰低密度脂蛋白）诱导铁死亡，再进行MCL的处理验证。通过C11-Bodipy 荧光探针实验（和MDA、4HNE差不多，这也是常用的铁死亡的验证实验，在《信号通路是什么鬼？》系列里也都介绍过了），评估巨噬细胞的脂质ROS水平，结果发现MCL能有效抑制巨噬细胞的铁死亡：

同时MCL也能恢复ox-LDL导致的线粒体功能失调，这里他们检测了氧化呼吸：

抑制铁死亡的机制有很多，其中NRF2就是个关键，因为NRF2是能激活包括GPX4和SLC7A11的转录的（这个在《信号通路是什么鬼？》系列的铁死亡调控里，也给你们讲清楚了）：

那么MCL会低NRF2有啥影响呢？他们发现MCL可以增强巨噬细胞，以及AS模型小鼠中的NRF2产生核易位，对于一个转录因子而言，核异位也就说明了NRF2可能激活了转录活性：

那既然NRF2在这个过程中，起到了在MCL调控下抑制下游铁死亡的功能，那么为了说明这一点，他们对巨噬细胞和AS模型小鼠使用了NRF2抑制剂（这个其实是柯霍氏法则的验证，可以看看《轻松的文献导读》和《列文虎克读文献》）。结果发现，抑制了NRF2后，MCL对于铁死亡的抑制效果丧失了：

同样，在AS模型小鼠在使用了NRF2抑制剂后，MCL也无法再缓解AS的病程：

那这是因为啥呢？大家如果熟悉铁死亡的调控（当然，这个其实也在《信号通路是什么鬼？》系列里铁死亡调控机制里讲过的，大家可以回去看看）。NRF2的调控有这么几个机制，当NRF2和KEAP1结合后，就丧失了NRF2转录的功能。而KEAP1和p62竞争性结合后，会使得KEAP1和NRF2脱离，使得NRF2自由入核激活转录：

通过分子对接，他们发现NRF2/KEAP1和MCL/KEAP1之间已识别位点的重叠，也就是说MCL可能也能通过与KEAP1的竞争性结合，抑制NRF2和KEAP1的结合，从而促进NRF2的核异位：

于是他们对KEAP1进行了突变，主要就是突变了MCL和KEAP1结合的Arg483位点（这个真的做得不错，这个KEAP1的突变可以解决之前使用NRF2抑制剂所产生的肯定后件的逻辑谬误，不清楚这是为什么的话，可以去看看《列文虎克读文献》和《信号通路是什么鬼？》系列）。结果发现，MCL的确是通过与KEAP1Arg483位点的竞争性结合，来抑制巨噬细胞铁死亡并改善线粒体功能的：

体内实验也表示，当KEAP1上的Arg483位点突变后，MCL则无法对AS模型小鼠的体内动脉粥样硬化和巨噬细胞铁死亡，起到保护作用：

这篇文章看完，你有什么感受呢？可以在评论区和夏老师互动。夏老师觉得这篇文章从逻辑上，就做得很严谨，当开头看到他们使用NRF2的抑制剂的时候，还以为可能又是一篇有缺陷的文章。但最后他们通过MCL与KEAP1的结合作为切入点，进行验证的时候，我就觉得这篇文章没什么可挑剔的了。好了，今天就先策到这里吧，希望能有更多验证更严谨的文章能涌现出来，有兴趣的话一定要看看原文哦，祝你们心明眼亮。

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