夏老师在PubMed上冲浪的时候，看了看巨噬细胞相关的高分文章，于是就看到了这么一篇首都医科大学附属北京佑安医院发表在10.7分的J Adv Res上的文章。说到J Adv Res这本期刊，其实影响因子还是不错的，刚从二区升到了一区。美中不足的就是审稿时间有点长，从提交到录用平均117天。但这篇文章从提交到接收，其实只用了两个月：
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这篇文章做的是动脉粥样硬化，他们分析了ANGPTL3（血管生成素样蛋白3）这个将脂靶点的表达。首先他们在LDLR-/-小鼠中进行了ANGPTL3的过表达，以此来分析ANGPTL3的功能（这其实就是一种反向遗传学的验证方法，通过对于某个基因的过表达或者敲减的操作，来查看表型。不清楚的话，可以看看《轻松的文献导读》）。结果发现ANGPTL3在LDLR-/-小鼠肝脏中的过表达，增加了小鼠高胆固醇血症的胆固醇水平和斑块进展：
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但这养的结果不能说明太多问题，为啥呢？因为动脉粥样硬化的模型有两种，一个是LDLR-/-小鼠，这个是必须通过HFD（高脂饮食）诱导的。他们觉得可能ANGPTL3的表达还受到了HFD的影响，于是他们就使用了另一种模型APOE-/-的小鼠，这种小鼠不用HFD也能形成动脉粥样硬化。在APOE-/-的小鼠中，敲除了ANGPTL3，则能抑制APOE-/-小鼠斑块进展（这个其实就是柯霍氏法则的验证，通过敲减，分析基因功能，不清楚的话，可以看看《轻松的文献导读》和《列文虎克读文献》）：
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那么ANGPTL3是否对动脉粥样硬化斑块产生有直接的贡献呢？那就首先要确定ANGPTL3是否会在斑块上有高表达，结果他们发现ANGPTL3的确会在动脉粥样硬化的斑块上有高表达的现象，出现了归巢也就是共定位：
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那具体是什么细胞高表达了ANGPTL3呢？他们进一步分析在斑块中与ANGPTL3共定位的细胞标志物，结果发现CD68+的巨噬细胞和ANGPTL3会共定位。也就是说斑块形成可能与高表达ANGPTL3的巨噬细胞有关：
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之前的研究表明，ANGPTL3的FBN结构域可以通过促进内皮细胞或脂肪细胞中的磷酸化途径，来调节细胞功能，于是他们进行了ANGPTL3的磷酸化谱分析（下面这些热图、火山图之类的应该都会看了吧，在《夏老师带你读文献》里也都讲过）：
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结果发现ANGPTL3与IL17相关的通路激活有一定的相关性，ANGPTL3的FBN结构域可以增强炎性细胞因子的表达，例如IL1β、MIPα和TNFα等等。这些细胞因子其实就解释了ANGPTL3对于巨噬细胞M1极化的贡献：
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那熟悉巨噬细胞极化以及炎症因子表达相关信号通路的话，应该能想到这是激活了什么信号通路，对就是NFκB信号通路和Toll样受体信号通路（这俩信号通路其实在炎症因子表达中是非常常见的，也是研究巨噬细胞或者炎症相关免疫细胞应该熟悉的，不清楚的话，可以看看《信号通路是什么鬼？》系列，复习下）。他们发现ANGPTL3的FBN结构域能增加TLR4的转录及蛋白表达，但FBN结构域实际上是通过磷酸化激活的，也就是说TLR4激活的上游还有个激酶：
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于是他们从中发现了AKT（PI3K-AKT信号通路中的AKT，是个四通八达的激酶了，在各个信号通路中，都隐约有着AKT的身影，特别是在NFκB的反馈通路中，不清楚的话，可以看看《信号通路是什么鬼？》系列），他们发现ANGPTL3的FBN结构域通过AKT的磷酸化促进TLR4表达，而TLR4的表达激活，又增强了NFκB信号的激活。既然是这样，ANGPTL3在动脉粥样硬化斑块中的表达，应该是呈增多的趋势的，结果也符合预期：
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最后，他们形成了这样的示意图：
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之前研究中显示，ANGPTL3的Coil-Coil（螺旋线圈结构域）可以抑制脂蛋白脂肪酶活性，导致血液中LDL-c和甘油三酯水平升高。而这篇文章展示出巨噬细胞中的ANGPTL3的表达增多，其FBN结构域，可以通过激活AKT磷酸化促进TLR4的转录，而TLR4的转录会激活NFκB信号通路。由此炎症相关因子转录被激活，从而导致巨噬细胞的M1极化，从而引发动脉粥样硬化的斑块产生。这篇文章从内容上来说，其实做的还是不错的，单独研究分析了ANGPTL3的FBN的结构域对于下游的影响，其工作量还是不少的。但同时ANGPTL3→AKT→TLR4→ NFκB→炎症因子→巨噬细胞M1极化，这个验证的过程还是稍显单薄了。如果增强这部分的验证，可能可以上更高的期刊。好了，今天就先策到这里吧，有兴趣就看看原文，祝你们心明眼亮。
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