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‍摘要：诺如病毒是引发全球急性胃肠炎的头号“元凶”，每年导致数亿人感染。然而，其基因高度多变、缺乏交叉免疫的特性，使疫苗研发困难重重。中国科研团队近期在《Viruses》期刊发表重磅成果：基于减毒痘苗病毒VG9载体的双价疫苗VG9-NOR，成功覆盖两大流行毒株GII.4和GII.17，动物实验显示其安全高效，为全球首款广谱诺如病毒疫苗奠定基础。

研究背景：诺如病毒为何难防？

高传染性：10-100个病毒颗粒即可致病，通过呕吐物气溶胶快速传播。
基因多样性：10个基因群（GI-GX），人类主要感染GI、GII等，其中GII.4占全球病例70%-80%，GII.17近年快速崛起。
免疫屏障缺失：不同基因型间无交叉保护，传统单价疫苗难以应对变异。

疫苗设计：痘苗病毒载体的三大优势

研究团队选择减毒痘苗病毒VG9作为疫苗载体，其特点包括：
✅ 低毒性：经3轮噬斑纯化，致病性显著降低；
✅ 高容量：可插入长达25kb外源基因，轻松携带多价抗原；
✅ 强免疫：天然激活黏膜和系统性免疫应答。

构建过程（图1）

基因插入：将GII.4和GII.17的VP1基因分别置于ELO160和PE/L启动子下，避免表达干扰。
荧光筛选：插入EGFP标记基因，通过10轮噬斑纯化获得重组病毒VG9-NOR-EGFP。
标记敲除：使用Cre重组酶切除EGFP，最终得到无标记疫苗株VG9-NOR。
验证：Western blot证实VP1蛋白稳定表达（图1D-E），PCR验证基因精准插入（图1C）。

图1：（A）VG9-NOR基因结构；（B）EGFP敲除荧光对比；（C）VP1基因插入验证；（D-E）VP1蛋白表达检测。

安全性评估：动物实验数据亮眼

1. 复制能力与遗传稳定性

细胞实验：VG9-NOR在Vero、BHK-21和HeLa细胞中的增殖曲线与原始VG9毒株高度一致（图2A）。
传代稳定性：连续传代6次后，VP1蛋白表达未衰减（图2C-D），基因无丢失突变。
鸡胚模型：接种后CAM痘斑形态、数量与VG9无差异（图2B），证实载体安全性。

图2：（A）病毒增殖曲线；（B）鸡胚CAM痘斑对比；（C-D）传代后VP1表达稳定性。

2. 病理与毒力测试

小鼠器官病理切片：接种后14天，心、肝、脾、肺等均未见明显病变，仅肺部轻微淋巴细胞浸润（图3A）。
兔皮肤实验：低剂量VG9-NOR引发的痘斑消退速度快于VG9（图3B-C），提示外源基因插入可能轻微削弱复制力。
体重监测：小鼠接种后13天内体重波动<5%，无显著健康影响（图3D）。

图3：（A）小鼠肺组织病理切片；（B）兔皮肤痘斑对比；（C）痘斑大小变化；（D）小鼠体重监测。

免疫效果：双管齐下，攻防兼备

1. 体液免疫：抗体滴度飙升

血清抗体：高剂量鼻内免疫组IgG滴度达2²¹（GII.4）和2¹⁹（GII.17），显著高于肌肉注射（图4B）。
黏膜免疫：鼻内组肠道IgA阳性率100%（GII.17），肌肉注射组仅60%（图4E）。
阻断效力：HGBA阻断抗体（BT50）滴度超1:1600，可有效阻止病毒黏附宿主（图4D）。

2. 细胞免疫：Th1应答激活

CD4⁺ T细胞：分泌IL-2和TNF-α水平显著升高（图5A-B），提示Th1型免疫主导。
CD8⁺ T细胞：对GII.17的特异性IFN-γ应答增强（图5C），或为长期免疫记忆提供支持。

图4：（B-C）血清IgG/IgA水平；（D）HBGA阻断效果；（E）肠道IgA阳性率。

图5：CD4⁺/CD8⁺ T细胞因子分泌水平。

突破与展望：距离临床应用还有多远？

研究亮点

首创双价设计：同步靶向GII.4和GII.17，覆盖主流流行株。
鼻内接种优势：直接激活黏膜免疫，模拟自然感染防御路径。
安全可控：动物模型未见毒副作用，遗传稳定性达临床前标准。

下一步挑战

🔬 非人灵长类验证：需在猴模型中评估实际保护效果；
🔬 接种方式优化：探索口服或皮下接种的可行性；
🔬 长期免疫监测：抗体持久性及对变异株的交叉保护能力。

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痘苗病毒载体双价诺如病毒疫苗研究新进展

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